内毒素检测的结果高 【检测技术】 内毒素检测结果异常的原因

2019-04-11 - 内毒素检测

内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁组分之一,当细菌死亡或自溶后便会释放出内毒素,内毒素是常见的外源性热原,具有致热性。临床上动物进行静脉滴注输液时或注射疫苗是,如果药品或疫苗中含有热原,动物在短时间内出现发热、寒颤、呕吐等症状,严重者可至休克,死亡的这种现象称为热原反应。

内毒素检测的结果高

药品及疫苗液中细菌内毒素检查法(BET)是利用鲎试剂来检测或量化由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素,以判断药品或疫苗中内毒素的限量是否符合相关规定的一种方法。常用的方法有凝胶法和光度法,现将这两种方法中常见的异常结果分析如下。

内毒素检测的结果高

凝胶法

该法中常出现鲎试剂灵敏度复核不符合规定、阴性对照阳性、阳性对照阴性、供试品阳性对照阴性和同一批供试品有时阳性有时阴性的情况。

1.1、阴性对照阳性 出现这种情况时要考虑实验环境是否有扬尘,实验器具如移液管、反应管、吸头污染或没有完全除热原,操作人员操作是否规范,实际如鲎试剂和水的质量问题,如果恒温时用水浴锅时是否有水浴锅内的水进入反应管中。

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1.2、阳性对照阴性 标准内毒素溶液系列浓度制备是否准确,恒温温度和时间是否合适,操作人员操作是否规范,试验用试剂质量是否合格或匹配,用器具有否干扰。

1.3、供试品阳性对照阴性 若阳性对照阴性,供试品阳性对照阴性,跟2中的可能情况一样分析,若阳性对照阳性,供试品阳性对照阴性则考虑供试品阳性对照溶液制备是否正确,供试品可能存在干扰,这时可通过稀释供试品的方法消除干扰。

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1.4、阴性对照正常,供试品阳性 一般会判断为供试品阳性,但是这种情况应该考虑有没有试验用具如反应管、稀释管和吸头,人为操作或环境和试剂等造成的污染,当然也有可能出现假阳性。

1.5.同一供试品检测结果有时阳性有时阴性 供试品内毒素含量在1/2L左右时,检验同一批供试品用了抗干扰能力不同的试剂,环境、人员操作过程和恒温孵育过程都有可能造成这种情况。

光度法

光度法除了凝胶法可能出现的情况外,还可能存在标准曲线的线性不合格,内毒素回收率不合格和变异系数偏大的情况。

2.1、标准曲线线性不足: 标准品存储不当造成标准品内毒素含量不准,检验用具除热源不彻底有干扰,标准品系列浓度制备有误差或稀释中混匀不充分,试剂污染或检测能力不足,预设RT/OD值设置不合理。

2.2、变异系数偏大: 除了检验用具污染或未彻底除热源、试剂质量、操作人员操作误差之外,还应考虑在反应管中加样时有没有产生气泡,样品本身沉淀或有悬浮颗粒不适合光度法测定。

2.3、回收率不合格: 标准内毒素溶液系列浓度制备或加样不准确,试剂加入不准确和供试品内毒素含量太高需进一步稀释,供试品存在抑制或增强作用。

综上所述,影响药品或疫苗中内毒素检测结果的因素有环境,人员操作,试剂质量,检验用具处理情况等诸多因素,只有严格按操作规程,认真排除各种可能影响检验结果的每项因素,才能保证内毒素结果的准确性。

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